Departmental Bulletin Paper 〈研究ノート〉L -カルニチン添加体外成熟培地がマウス卵子細胞質内活性酸素種に与える影響

井上, 達也  ,  東, 里香  ,  野田, 義博  ,  西村, 愛美  ,  梶本, みずき  ,  小橋, 朱里  ,  折杉, 卓哉  ,  細井, 美彦  ,  安齋, 政幸

本研究では、私たちが以前報告した、修正TaM 培地へL -カルニチンを添加した体外成熟培地を用いたマウス未成熟卵子への体外成熟培養をおこない、卵子細胞質内で産生される活性酸素種に与える影響を検討した。修正TaM 培地へL -カルニチンをそれぞれ1mM, 2mM, 5mM, 10mM 添加し体外成熟培養をおこなった結果、82~98%が正常なMⅡ期卵子へと発生した。次に、各L -カルニチン添加区において、正常に発生した体外成熟卵子は、卵子細胞質内における活性酸素種の産生を蛍光輝度より測定した。その結果、活性酸素種の産生は、それぞれ353.61 ± 15.34 ~ 415.62 ± 25.82 pixel の蛍光強度を発しており、全てのL -カルニチン添加区は、非添加区(581.82±43.33 pixel)と比較し過剰な活性酸素種の産生を抑制することが示された。In this study, we investigated the effect of L-carnitine in IVM medium( modified TaM; mTaM) on the production of reactive oxygen species( ROS) in ooplasm during in vitro maturation( IVM) of immature oocytes. IVM culture in mTaM containing 1-10 mM L-carnitine showed well maturation rate ranged from 82% to 98%. Then, MII oocytes normally developed in mTaM containing L-carnitine were measured the yield of ROS in ooplasm by oxidized DCFDA detection assay with a fluorescence microscope. As a result, fluorescence intensity of L-carnitine-treated groups ranged from 353.61 to 415.62 pixels in comparison to 581.82 pixels in L-carnitine-free control experiment. Furthermore, in vitro matured oocytes treated with L-carnitine showed lower fluorescence intensity than ovulated oocytes. In conclusion, it can be considered that L-carnitine in IVM medium reduces an excessive yield of ROS in ooplasm in in vitro maturation of immature oocytes.

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