Research Paper 光架橋反応を用いた19FーNMRによる核酸類検出法の開発

藤本, 健造

Description
19F NMRのケミカルシフトを用いた核酸類検出法は、生体バックグラウンドが皆無であり、高い生体透過性を有することから、生体内などの夾雑試料中での核酸検出法として注目されている。本研究では、夾雑試料中でもB/F分離可能な大きなケミカルシフトの変化(8.0 ppm)を誘起可能な新規核酸類検出法(19F NMRを用いた核酸類検出法)を開発した。さらに、実際の生体内に存在する核酸濃度は低い為、増幅系を組み込んだ配列選択的な核酸類検出法を開発し、最終的にnmスケールの核酸類の検出にも成功した。:We demonstrated an approach for the chemical shift-based detection of nucleic acids based on CNVK (cyanovinylcarobazole) mediated DNA/RNA photo-cross-linking. The 19F NMR signal of TFT(trifluoromethyl thymidine) in a DNA duplex structure was dramatically shifted from -63.2 ppm to -71.2 ppm induced by photo-cross-linking. This larger chemical shift change induced by CNVK mediated DNA photo-cross-linking enables DNA and RNA detection without confounding effects due to the influence of neighboring bases. We have also successfully demonstrated that 10 nM miRNA can be detected in a sequence-specific manner based on miRNA amplification and chemical shift caused by the photo-cross-linking of CNVK and TFT in DNA and RNA.
基盤研究(B)(一般)
研究期間:2014~2016
課題番号:26288077
研究者番号:90293894
研究分野:核酸化学
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